倒置荧光显微镜使用指南

    1．按下接线板电源，打开计算机屏幕电源和主机箱电源，双击桌面上ApplicationSuite图标进入程序。

    2．打开倒置荧光显微镜光源，如需使用汞灯，打开汞灯，在记录本上记录下汞灯上显示的已用小时数。

    3．倒置荧光显微镜物镜放大倍数有5倍，10倍，20倍，40倍，旋转物镜下转盘改变放大倍数。

    4．倒置荧光显微镜明场使用方法：将透射光装置的聚光镜转盘旋转至BF档。选择合适的物镜，调节焦距，用明视光源强度旋转及透射光装置上的光圈调节光源强度。将滤色块放在第4或5档。

    5．倒置荧光显微镜相差使用方法：将透射光装置的聚光镜转盘转至PH1档〔物镜为10x,20x时〕或PH2档〔物镜为40x时〕。用明视光源强度旋转及透射光装置上的光圈调节光源强度。将滤色块放在第4或5档。

    6．倒置荧光显微镜荧光使用方法：放下明场遮拦，拉开荧光遮拦棒，旋转滤色块转盘，选择合适的激发波长。用荧光光源视野调节旋钮和荧光光源光圈调节旋钮调节荧光的范围和强度。

    7．图像处理：在“摄取”菜单栏Mic1卡片下根据所选的物镜倍数选择放大倍数。拉开显微镜摄像头操纵杆，单击鼠标左键选择一块白色区域，单击鼠标右键，进行白平衡。可以通过改变摄取菜单栏摄像头卡片下曝光，饱和，伽马和增益改变显示图像的效果。明场或者相差模式，建议将增益放在零。单击拍摄，新建自己的文件夹，保存图片。

    8．荧光拍摄完毕，推进荧光遮拦棒。

    （1）如果下一个使用时间小于或等于1个小时，不需要关闭倒置荧光显微镜汞灯，记录下汞灯使用时间。将明场电源旋至低处。将物镜旋至空档。关闭应用程序。

    （2）否则，使用完毕荧光，及时关闭汞灯，注意需长于半个小时，记录下汞灯使用时间。将明场电源旋至低处，关闭明场电源。将物镜旋至空档。关闭应用程序。

    奥林巴斯倒置荧光显微镜IX73为例说明其使用步骤

    1．接通电源线

    打开电源开关，同时按下显微镜前面的按纽

    2．用光路选择杆选择"观察"光路（有眼睛图形），选择所需放大倍数的物镜，并将选择环置于相应的位置（1－PHL：4X；2－PHC：10X和20X；3－PH2：40X，4为明场；荧光选择钮置于BF）使用光调节旋钮和滤光片，调节至适当亮度

    3．将标本放在载物台上，转动粗微调调节焦距使视野内图象清晰

    4．调节目镜使观察舒适

    5．如需拍照，则打开电脑

    进入软件，将光路杆调至"旁路光口"（有相机图形），即可拍摄并保存

    6．使用完毕后，关闭主开关（至O），取下电源插头等到灯室完全冷却后把防尘罩盖上

    荧光观察

    1．如使用荧光，要接通荧光光源的电源

    2．选择所需波段的荧光，并用荧光调节杆调节亮度

    3．不观察时，要及时使用光栅切断荧光（●－关，○－开），避免样品荧光衰减

    4．如荧光较暗，将周围光亮度减至低（关灯，拉上窗帘）

    5．拍摄步骤同前

    正置与倒置荧光显微镜区别

    正置荧光显微镜与倒置荧光显微镜的区别主要是从显微镜工作方式上来区分的。正置荧光显微镜就是常规的荧光显微镜，物镜在工作台的上方进行观察的方式。落射荧光显微镜与透射荧光显微镜是从照明方式上来区分的，落射荧光显微镜的激发光源是经过物镜照射到样品上的（一般样品放培养皿里）。所以可以称正置/倒置荧光显微镜。

    正置荧光显微镜和落射荧光显微镜是从显微镜工作方式上来区分的，倒置荧光跟正置荧光比较，倒置荧光显微镜的物镜在所观察物体底下，正置荧光显微镜的物镜在所观察物体的上面。倒置荧光显微镜一般是观察在培养皿中培养的活体细胞，正置荧光显微镜一般是观察可以放到载波片上看的物体。

    主要用途：物体构造的观察，荧光的有无、色调比较进行物质判别，发荧光量的测定对物质定性、定量分析

    荧光显微镜按光源分：透射式与落射式

    透射式：激发光来自被检物体的下方，聚光镜为暗视野聚光镜，使激发光不进入物镜，而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮，而高倍则暗，在油浸和调中时，较难操作，尤以低倍的照明范围难于确定，但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。

    落射式：透射式目前用的较少，新型的荧光显微镜多为落射式，光源来自被检物体的上方，在光路中具有分光镜，所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用，不仅便于操作，而且从低倍到高倍，可以实现整个视场的均匀照明。

    倒置荧光显微镜的用途是什么？

    倒置荧光显微镜是由倒置显微镜和落射荧光装置组成。倒置显微镜具有在培养瓶或培养皿内进行显微镜观察的特点，落射荧光装置适用于荧光显微术。该仪器特别适用于对活体细胞和组织、流质、沉淀物等进行显微研究，是生物学，细胞学，遗传学、免疫学等研究工作的理想仪器。可供科研、高校、防疫和农牧等部门使用。

    什么是荧光显微镜的滤色系统？

    近年开始采用金属膜干涉滤板，由于针对性强，波长适当，因而激发效果比较玻璃滤更好。如西德Leitz厂的FITC专用KP490滤板和罗达明的S546绿色滤板，均远比玻璃滤板效果好。

    激发滤板分薄厚两种，一般暗视野选用薄滤板，亮视野荧光显微镜可选用厚一些。基本要求是以获得更明亮的荧光和好的背景为准。

    滤色系统是荧光显微镜的重要部位，由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号，各厂家名称常不统一。滤板一般都以基本色调命名，前面字母代表色调，后面字母代表玻璃，数字代表型号特点。如德国产品(Schott)BG12，就是种蓝色玻璃，B是蓝色的一个字母，G是玻璃的一个字母；我国产品的名称已统一用拼音字母表示，如相当于BG12的蓝色滤板名为QB24，Q是青色(蓝色)拼音的一个字母，B是玻璃拼音的一个字母。不过有的滤板也可以透光分界滤长命名，如K530，就是表示压制滤长530nm以下的光而透过530nm以上的光。还有的厂家的滤板完全以数字命名，如美国Corning厂的NO：5-58，即相当于BG12。

    激发滤板根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围的激发光。

    紫外光激发滤板：此滤板可使400nm以下的紫外光透过，阻挡400nm以上的可见光通过。

    紫外蓝光激发滤板：此滤板可使300～450nm范围内的光通过。

    紫蓝光激发滤板：它可使350～490nm的光通过。

    大吸收峰在500nm以上者的荧光素(如罗达明色素)可用蓝绿滤板(如B-7)激发。